SnapGene如何設計sgRNA,構建載體,對靶基因進行敲除
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面將以小鼠Mafb基因為例進行操作示範。
首先第一步時進行基因序列的獲取,使用UCSC基因組瀏覽器找到Mafb的基因,
觀察所需的基因資訊,該基因只有一個外顯子,並且位於負鏈的基因(轉錄方向為反向)
由於CIRSPR敲除機制的限制,在這裡我們需要在含有CDS的第一個外顯子的CDS區設計sgRNA,並且不能跨外顯子。我們首先需要將基因資訊複製到本地,建議儲存到snapgene中進行後續操作。獲取基因的方法使用UCSC的get gene
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